Pesquisa em Genes e Proteínas Acesso livre

Abstrato

Anticorpo para MyoD diminui o fenómeno orgânico da miogenina e o aglomerado de recetores de neurotransmissores induzidos por Agrin

 Erica E Anderson1, David H Campbell2, Kelly Ezell1, Paul R Standley2 e Wade A Grow1

Uma família de fatores restritivos miogénicos, bem como MyoD e miogenina, orientam a miogénese e a formação da junção contratante. O fenómeno orgânico da miogenina é ativado pelo MyoD, e uma das funções da miogenina é ativar o fenómeno orgânico do recetor do neurotransmissor (AChR) na junção contratante. Os neurónios motores libertam agrin à medida que se aproximam das fibras musculares em desenvolvimento, o que leva o aglomerado de AChRs existentes ao posicionamento da formação da junção contratante. anteriormente é incontestável que a exposição contínua à proteína MyoD ou à miogenina diminui o cluster de AChR induzido pela agrina na cultura de células musculares C2C12. O nosso objetivo era estabelecer especificamente como o MyoD e a miogenina se movem em desenvolvimento. Métodos: As culturas de células C2C12 foram expostas a manipulações experimentais, bem como a anticorpos para MyoD e miogenina e miogenina morfolino. O Endo-Porter costumava aumentar a absorção celular das manipulações experimentais. Foram realizados ensaios de aglomeração de AChR para avaliar o impacto da proteína ou do morfolino na aglomeração de AChR induzida pela agrina. Os Western blots acedem ao fenómeno orgânico da miogenina quando expostos a proteínas ou morfolino. Resultados: Os resultados aqui demonstrados demonstram que a exposição de apenas oito horas da proteína à miogenina irá diminuir a acumulação de AChR induzida pela agrina nos miotubos. É anteriormente incontestável que algumas manipulações experimentais reduzem o fenómeno orgânico da miogenina simultaneamente com uma diminuição do aglomerado de AChR induzido pela agrin. estes resultados estabelecem muito especificamente como o MyoD e a miogenina se movem na formação da junção contratante, demonstrando que a exposição proteica ao MyoD reduz o fenómeno orgânico da miogenina simultaneamente com uma diminuição do cluster de AChR induzido pela agrina. Conclusão: Estes resultados sugerem que MyoD é crucial para a aglomeração de AChR induzido por agrina através de um mecanismo que tem ativação do fenómeno orgânico da miogenina, resultando na ativação do fenómeno orgânico de AChR, Associate in Nursingd, em última análise, produção de um nível aplicável de AChR para o AChR induzido por agrina formação de aglomerados e junções contratantes. Os AChRs foram marcados pela ligação de α-bungarotoxina conjugada com tetrametil rodamina (Molecular Probes). As culturas foram incubadas dentro do meio contendo toxina durante meia hora a 37°C para marcar os AChRs quando setenta e duas horas em DM. as cunhas de capuz foram enxaguadas três vezes com solução salina tamponada com fosfato (PBS), montadas durante dez minutos com um par de paraformaldeído em PBS, enxaguadas três vezes com PBS, desidratadas em álcool de madeira fria durante cinco minutos a -20°C e montadas em lâminas de ampliação em meio de montagem Vectashield para luz visível (Vector Laboratories). Os enxames de AChR foram visualizados com a lupa invertida Associate in Nursing IX70 Olimbos abaixo da objetiva de 20X (produzindo uma ampliação completa de 200X). imagem digital Magnafire.Aglomerados brilhantes de AChRs foram descobertos em todos os aspetos dos miotubos em imagens fluorescentes. cada imagem em tons de cinzento foi analisada pela fórmula de identificação de objetos do Cell Profiler. a borda utilizada na fórmula foi delineada como a intensidade fluorescente mínima que um pel deve apresentar para ser contabilizado como parte de um cluster. A experimentação com a orla revelou que um brilho mínimo de septuagésimo melhor delineava um pel com luz visível suficiente para ser contado como parte de um cluster, e este limiar foi utilizado para todas as análises. para garantir um bom julgamento e uma quantificação consistente, a borda e todas as configurações alternativas permaneceram constantes em todos os grupos e imagens. Os modelos de ativação de sequências ao longo da miogénese prevêem que os genes são ativados consecutivamente, começando pela ativação da miogenina pelo MyoD. O plano inicial de Associate in Nursing para a diferenciação miogénica combinou a ligação do problema de transcrição em todo o genoma e a identificação da expressão para melhor elucidar o programa de diferenciação miogénica nas células musculares da classe. Os fatores restritivos miogénicos direcionam a miogénese, bem como a montagem da junção contratante. Especificamente, o projeto inicial revelou que, no crescimento dos mioblastos, o MyoD tinha como alvo genes envolvidos na especificação e na contração da junção.
Palavras-chave: AChR; Agrina, C2C12; expressão de sequência; MyoD; Miogenina; junção do empreiteiro.