Revista de Farmácia e Pesquisa Farmacêutica Acesso livre

Abstrato

Bioprospecção e engenharia racional de nova L-asparaginase para apresentar um melhor biofármaco para tratamento de câncer de sangue

Tales A Costa-Silva, IM Costa, GS Agamez-Montalvo, A Pessoa e G Monteiro

Introdução : A L-asparaginase (EC3.5.1.1) produzida por bactérias é usada no tratamento de leucemia linfocítica aguda (LLA). No entanto, inúmeros efeitos colaterais foram registrados pelo uso de L-ASNase bacteriana durante o tratamento de LLA. Outras desvantagens associadas ao tratamento com L-asparaginase procariótica são reações de hipersensibilidade, baixa estabilidade térmica, degradação de proteases humanas e rápida depuração.

Objetivos : Algumas técnicas foram usadas para superar essas desvantagens, como a bioprospecção de fontes eucarióticas ou a modificação da L-asparaginase bacteriana comercial por mutagênese direcionada ao sítio. Para encontrar fontes eucarióticas de L-ASNase, 20 fungos filamentosos foram usados ​​neste estudo, que foram isolados do microbioma da água-viva Olindias sambaquiensis.

Resultados : Seis amostras de fungos isoladas de tentáculos de águas-vivas (estruturas marrons em águas-vivas responsáveis ​​pela produção de toxinas) apresentaram produção de L-asparaginase pelo processo de fermentação submersa. A maior atividade foi demonstrada pela cepa OS02 com 2,7 U/g. Esta cepa foi selecionada para otimização da produção de L-asparaginase pelo delineamento composto central da metodologia de superfície de resposta. Para produção máxima de enzima (11,45 U/g), a melhor condição foi o meio Czapek Dox modificado suplementado com L-asparagina e ajustado para pH 7,4 a 32,5 � C e 190 rpm.

Conclusões : Em relação à engenharia de proteínas da L-asparaginase bacteriana comercial, usamos mutagênese sítio-dirigida para obter resistência à protease da L-asparaginase: uma nova variante da L-asparaginase (EcAII) da Escherichia coli, mutante triplo. Os resultados preliminares mostraram que a enzima mutante foi expressa em E. coli BL21 (DE3) e preservou a atividade original da L-asparaginase. Essas formas proteo da L-asparaginase podem ser biofármacos alternativos com o potencial de melhorar ainda mais o resultado no tratamento de LLA.