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Abstrato

Monitorização de biópsia líquida de ADN tumoral livre de células circulantes e identificação de variações genéticas de cancro para diagnóstico de precisão

Michael J. Powell

Os actuais testes moleculares clinicamente disponíveis para detecção de variações de ácidos nucleicos, especialmente aqueles realizados em ácidos nucleicos livres de células circulantes presentes em fluidos biológicos, tais como o plasma sanguíneo do paciente, têm sensibilidade limitada. De forma a alcançar uma elevada sensibilidade para a deteção de apenas algumas moléculas alvo (alelos mutantes) presentes num grande excesso de moléculas não-alvo (alelos do tipo selvagem), metodologias sofisticadas que requerem instrumentação dispendiosa, operadores altamente qualificados e, em alguns casos , métodos de bioinformática de computação intensiva, como a PCR de gotículas digitais (ddPCR), a PCR de BEAMing e a sequenciação profunda de nova geração (NGS), estão a ser empregues em grandes centros de investigação clínica. A disponibilidade limitada, o elevado custo e os longos tempos de análise destes métodos levaram-nos a desenvolver uma nova tecnologia que possa ser realizada globalmente pelo pessoal de patologia existente com instrumentação que já está presente em todos os laboratórios de patologia hospitalar. No centro desta tecnologia inovadora estão novos análogos moleculares de ácidos nucleicos: os ácidos xenonucleicos (XNA) que possuem todas as bases naturais que ocorrem no ADN ligadas a uma nova estrutura química que absorve estas moléculas oligoméricas de ligação de ácidos nucleicos com uma excelente especificidade e uma ligação extremamente ávida. Qualquer variação na sequência à qual o XNA se liga cria uma energia livre termodinâmica diferencial de anomalia de ligação que foi explorada para desenvolver qPCR em tempo real baseado em ensaios de amplificação de alvo e NGS de sensibilidade extremamente elevada e ensaios de captura de hibridização baseados em esferas que podem detetar tão pouco como 2 cópias de modelos variantes num grande excesso de modelos de tipo selvagem em ADN obtido a partir de biópsias de tecidos ou ADN livre de células circulantes no plasma (cfDNA). Os produtos comerciais certificados CE/IVD que foram desenvolvidos e validados incluem testes baseados em qPCR em tempo real específicos do gene QClampTM, um novo teste de deteção de cancro colorretal denominado ColoScapeTM, uma plataforma NGS alvo baseada em amplicons de alta sensibilidade denominada OptiSeqTM e uma tecnologia de captura de hibridização de amplicon alvo multiplex para monitorização de mutações de sensibilização e resistência a medicamentos em doentes oncológicos. Esta apresentação irá discutir esta nova tecnologia inovadora e os diagnósticos de precisão e as oportunidades de terapia dirigida que oferece.