Pesquisa em Genes e Proteínas Acesso livre

Abstrato

Nova aplicação da protease de casca de Cucurbita maxima em detergentes

Vadivukkarasi S, Manikandan M Pavithra K e Vasudevan M

A enzima protease da casca de Cucurbita maxima foi isolada e purificada e estudada a sua aplicação na remoção de manchas de sangue. O pH e a temperatura óptimos para esta protease recentemente isolada foram de 7,0 e 40°C, respectivamente. O peso molecular da protease isolada foi determinado por SDS PAGE e verificou-se que era de 31 KD. Esta nova enzima protease foi aplicada em tecidos manchados de sangue para avaliar a capacidade de remoção de manchas da enzima na presença e ausência de detergentes. Dos resultados, confirma-se que a protease recentemente isolada remove completamente a mancha com detergentes e mesmo na ausência de detergentes. Este estudo confirma a aplicação da protease de casca de Cucurbita maxima na remoção de manchas de sangue.
O extrato proteolítico bruto termoestável e a protease purificada produzida por Aspergillus tamarii URM4634 foram investigados a diferentes temperaturas. Os resultados da atividade foram utilizados para estimar a energia de ativação da reação de hidrólise catalisada pelo extrato bruto e pela protease purificada (E* = 34,2 e 16,2 kJ/mol), bem como as respetivas variações padrão de entalpia de desdobramento enzima reversível (ΔH°u = 31,9 e 13,9 kJ/mol). Quando a temperatura foi elevada de 50 para 80 °C nos testes de atividade residual, a constante de velocidade específica da termoinativação do extrato proteolítico bruto aumentou de 0,0072 para 0,0378 min-1, enquanto a da protease purificada de 0,0099 para 0,0235 min-1. Estes valores, correspondentes às diminuições do tempo de semivida de 96,3 para 18,3 min e de 70,0 para 29,5 min, respetivamente, permitiram estimar a energia de ativação (E*d = 49,7 e 28,8 kJ/mol), entalpia (ΔH*d = 47,0 e 26,1 kJ/mol), entropia (ΔS*d = −141,3 e −203,1 J/mol K) e energia livre de Gibbs (92 ,6 ≤ ΔG*d ≤ 96,6 kJ/mol e 91,8 ≤ ΔG*d ≤ 98,0 kJ/mol) de termoinativação. Tais valores sugerem que esta protease, que se mostrou altamente termoestável em ambas as formas, poderá ser explorada com lucro em aplicações industriais. Tanto quanto sabemos, este é o primeiro estudo comparativo sobre parâmetros termodinâmicos de uma serina-protease produzida por Aspergillus tamarii URM4634.
As proteases, também chamadas de "enzimas de digestão", são biocatalisadores bem conhecidos. São comercialmente utilizados em diversas indústrias, como detergentes, alimentos, produtos farmacêuticos, diagnósticos, etc. cobertas pela protease e são consideradas a enzima comercial mais valiosa. A fonte de proteases é enorme e as proteases bacterianas são mais significativas em comparação com as proteases vegetais e animais devido ao seu rápido crescimento e podem ser facilmente manipuladas geneticamente. indesejáveis ​​​​que estão ausentes em sistemas microbianos ou animais. Isto torna os recursos enzimáticos proteolíticos baseados em plantas uma fonte valiosa com aplicações profundas na indústria de enzimas
. . Na presente investigação foi selecionada a planta Citrus decumana L. (família Rutaceae) por não existir qualquer relato disponível sobre a enzima protease e a sua caracterização. A planta selecionada está bem documentada com os seus usos medicinais: antiespasmódico, anti-
inflamatório , anti-sangramento, broncodilatador, antidiabético, anti-helmíntico. , Espanha
Resumo Alargado
Vol. 1, ISS. 1
2019
Investigação em
Desinfetante de Genes e Proteínas, etc. Assim sendo, o objetivo do presente estudo é caracterizar a protease e purificá-la parcialmente a partir das folhas de Citrus decumana L. visando que estas enzimas proteolíticas possam ser comercializadas como fonte alternativa.
Protease alcalina de Bacillus sp alcalifílico. O NPST-AK15 foi imobilizado em nanopartículas de sílica de casca mesoporosa (RT-MCMSS) funcionalizadas e não funcionalizadas do tipo chocalho por adsorção física e fixação covalente. No entanto, a abordagem de ligação covalente foi superior para a imobilização da protease NPST-AK15 nas nanopartículas RT-MCMSS-NH ativadas e foi utilizada para estudos posteriores. Em comparação com a protease livre, a enzima imobilizada exibiu uma alteração na temperatura e no pH ótimos de 60 para 65 °C e pH 10,5-11,0, respetivamente. Embora a protease livre tenha sido completamente inativada após tratamento durante 1 h a 60 °C, a enzima imobilizada manteve 66,5% da sua atividade inicial em condições semelhantes. A protease imobilizada apresentou kcat e Km mais elevados do que a enzima solúvel em cerca de 1,3 e 1,2 vezes, respectivamente. Além disso, os resultados revelaram uma melhoria significativa na estabilidade da protease NPST-AK15 em vários solventes orgânicos, tensioativos e detergentes para a roupa comerciais, após imobilização em nanopartículas RT-MCMSS-NH ativadas. É importante realçar que a protease imobilizada manteve uma eficiência catalítica significativa durante dez ciclos de reação consecutivos e foi facilmente separada da mistura de reação utilizando um campo magnético externo. Tanto quanto sabemos, este é o primeiro relatório sobre a imobilização de proteases em nanopartículas de sílica de núcleo magnético tipo chocalho @ casca mesoporosa que também desafiaram a compensação entre atividade e estabilidade. Os resultados sugerem claramente que o sistema enzimático imobilizado desenvolvido é um nanobiocatalisador promissor para diversas aplicações de bioprocessos que requerem uma protease.