Pesquisa em Genes e Proteínas Acesso livre

Abstrato

Purificação e Caracterização da Peroxidase de Caule de Brócolo (Brassica oleracea l. Var. Italica)

Qurratulain Ahmad, Amna Mehmood, Zainab Saeed, Madiha Fayyaz

A atividade enzimática foi aumentada durante a purificação, o que poderá exercer um efeito benéfico nas plantas. Métodos e resultados: A purificação enzimática incluiu a extracção, precipitação com (NH4)2SO4, diálise seguida de cromatografias sequenciais com Sephadex G-75 e Sephadex DEAE A-25. A enzima purificada foi caracterizada com o tempo, a estabilidade ao pH, os iões metálicos, a termoestabilidade e a cinética do substrato foi determinada utilizando o guaiacol como substrato. A dobra de purificação para a peroxidase de caule de brócolos purificada foi de 72,83 com um rendimento de 1,5%. O tempo ótimo para a atividade enzimática foi de 6 min. e manteve-se estável entre pH 4 a 8 tendo um pH ótimo de 6 utilizando o guaiacol como substrato. A enzima apresentou atividade máxima a 30°C e manteve-se estável até aos 50°C. O valor de Km da peroxidase de brócolos foi de 0,35 m.mol/ml e 33 U/ml para o substrato de guaiacol utilizando o gráfico de Lineweaver-Burk e da mesma forma utilizando o gráfico de Michaelis Menten, os valores foram de 0, 34 m.mol/ml. Metais como o Na+, Ca2+, K+, Mg2+ e Zn2+ não exibiram qualquer efeito na atividade enzimática.